همسانه سازی و بیان ژن لیپاز باسیلوسbacillus pumilus در مخمر pichia pastoris

لیپازها (تری آسیل گلیسرول آسیل هیدرولازها ec 3.1.1.3) هیدرولیز تری آسیل گلیسرول به اسیدهای چرب و گلیسرول را در حد فاصل لایه چربی و آب کاتالیز می کند. این آنزیم ها کاربردهای فراوانی در صنایع غذایی، کشاورزی، روغن، چوب و کاغذ، پزشکی و دارویی دارند. در این تحقیق ژن لیپاز باکتریایی باسیلوس پامیلوس بومی در میزبان پیکیاپاستوریس همسانه سازی و بیان شد. ژن لیپاز در حامل کلونینگ pgem5zf همسانه سازی شد و سپس با آنزیم های bamhi و ecori از حامل کلونینگ pgem5zf جدا و در حامل بیانی ppic9 که با همان آنزیم ها برش خورده بود تحت کنترل راه انداز الکل اکسیداز همسانه سازی شد. سازه حاصل پس از تأیید همسانه سازی با روش های ملکولی و آنزیمی، از طریق روش الکتروپوریشن به درون ژنوم مخمر بیانی پیکیا پاستوریس انتقال داده شد. بیان آنزیم لیپاز در محیط کشت مناسب با تست پارانیتروفنیل پالمیتات(pnpp) و روش sds-page بررسی شد. نتایج نشان دهنده بیان لیپاز نوترکیب به صورت پروتئین ترشحی بود